Romero Martines Minerva
Esquivel León Jesica Ivon
Alvarado Cruz Flor Gretel
Montes de Oca Resendiz Carolina
Rangel Valdez Maria Lucia
miércoles, 6 de junio de 2012
INTRODUCCION
En este blogg se hablara el objetivo la clasificación los usos entre otros aspectos de los siguientes temas:
- Seguridad en el laboratorio de microbiología
- Medios de cultivo
- Tinciones usadas en microbiología
- Microbiología de los alimentos
- Enfermedades producidas por consumir alimentos en mal estado
- Descripción de microorganismos usadas en la industria alimentaria
Ademas se hablara de las practicas realizadas en el laboratorio de microbiología los temas que se elaboraron en el blogg son los siguientes:
- Reconocimiento del material de laboratorio de microbiología.
- Esterilización del material de microbiología
- Preparación de medios de cultivo
Reconocimiento del material de laboratorio
OBJETIVO:
Saber los distintos materiales que se utilizan en un laboratorio de microbiología así como su función.
INTRODUCCIÓN:
Es de gran utilidad conocer los diferentes tipos de material que hay dentro de un laboratorio y su uso para el manejo eficaz y consiente de su función.
DESARROLLO:
Saber los distintos materiales que se utilizan en un laboratorio de microbiología así como su función.
INTRODUCCIÓN:
Es de gran utilidad conocer los diferentes tipos de material que hay dentro de un laboratorio y su uso para el manejo eficaz y consiente de su función.
DESARROLLO:
Tubos de
Ensayo:
Se emplean como recipientes de medios de cultivo
Cápsulas
o Placas Petri:
Cajas cilíndricas, se emplean como recipientes de medios de
cultivo para el cultivo y aislamiento de microorganismos.
Placas
Brewer:
Para el cultivo y aislamiento de microorganismos
anaeróbicos. Son idénticas alas anteriores, con excepción de las tapas que
además de ser mas pesadas están adaptadas para crear anaerobiosis.
Pipetas:
Tubos cilíndricos delgados terminados en punta, graduados al
décimo o al centésimo de mI. Se emplean en la medición de pequeñas cantidades
de líquidos.
Matraces
y Erlenmeyers:
Recipientes de forma cónica y cuello corto, volumétricos
útiles para la preparación y almacenamiento de soluciones, colorantes,
reactivos, medios de cultivos, etc.
Matraces
Aforados o Fiolas:
Recipientes de forma esférica y base plana. Están
calibr4ados a medidas exactas mediante un foro en la parte media del cuello del
recipiente en el que se indica la medida.
Kitasato:
Son frascos muy parecidos a los Erlenmeyers, se caracterizan
por sus paredes gruesas y por una tubuladura lateral en el cuello, la misma que
sirve de tabulación lateral para hacer el vacío.
Porta objetos:
Son laminas de vidrio rectangulares de 70 mm de largo, por 26mm de
ancho y de 1mm de espesor, los bordes están generalmente biselados, los
excavados en gota pendiente.
Cubre objetos:
Son delgadas láminas de vidrio de forma cuadrada o redonda
de medidas variables, comprendidas generalmente entre 15mm a 22mm, o más de
diámetro o lado, por 0.17 a
0.20mm de espesor.
Tubos de fermentación Durham:
Son pequeños tubos de 70 x 10 Mm , que se coloca al fondo
de un tubo de ensayo y que se utiliza para evidenciar la producción de gas de
una bacteria al fermentar determinados azucares.
Tubos de centrifuga:
Se emplean para contener líquidos de los que quiere separar
por la fuerza centrifuga, partículas, células o microbios que se encuentren en
suspensión. Son de diversos tamaños, formas y medidas, las cuales desde 5ml de
capacidad hasta 300ml.
Frascos Kita Sato:
Son matraces de forma igual a los Erlen Meyer, de vidrio más
grueso y con una tubuladora lateral. Se utiliza para filtrar al vacío.
Vasos cónicos:
Son probetas de forma cónica con el vértice truncado hacia
abajo. Las hay graduales y sin graduar.
Asa de platino, agujas de inoculación, mangos
de kolle:
Estos son instrumentos muy usados en microbiología. Los
primeros son alambres de platino o de níquel-cromo, de unos 6 a9cm de longitud
por 1mm mas o menos de grosor, que van insertadas en el extremo de una varilla
con dispositivo de rosca en el extremo. MANGO KOLLE. Se llama asa cuando el
extremo libre se dobla en forma de anillo bien cerrado y con el diámetro de mas
o menos 4mm /asa normal y se utiliza para sembrar en la superficie de los
medios sólidos o para tomar pequeñas porciones de cultivo liquido para su
traspaso a otro medio o para su examen microscópico.
OBSERVACIONES:
RESULTADOS:
Conocimos los diferentes tipos de materiales existentes en el laboratorio y su función para poder utilizarlos en las siguientes practicas
CONCLUSIONES:
Es importante saber cuales son los materiales de microbiología y como se utilizan ademas de su función.
Esterilización del material de microbiología
Objetivo:
Obtener material sin bacterias para utilizarlo en medios de cultivo
Introducción:
Desde hace mucho tiempo es un reto el control de enfermedades infecciosas por destrucción, disminución de su número o inhibición de microorganismos.
Se puede llevar a cabo con diferentes métodos en función del lugar a aplicar y el grado de erradicación microbiana que se pretende conseguir.
Desarrollo:
1.
Esterilización.
Los métodos más importantes son:
a.
Flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la exposición de un objeto a efecto de la llama
hasta la incandescencia. Se esteriliza de esta forma, p. ej. ansas de cultivo
de siembra.
b.
Incineración: es el mejor sistema para esterilizar todas aquellos productos en los
que no importe su destrucción, p. ej. material biológico
c.
Estufa: calor seco a
alta temperatura, 20 minutos durante 180º, 60 minutos a 160º,
siendo suficiente la esterilización durante 60 minutos a 100-140º, se lo
utiliza para esterilizar material de vidrio debidamente envuelto en papel, metal.
etc.
2.- Calor Húmedo.
La esterilización con calor húmedo (vapor d agua) es mucho más rápida y eficaz que el calor seco debido a
que las moléculas de agua desnaturalizan las proteínas de forma irreversible mediante rotura
de los uniones H entre los grupos peptídico a temperaturas relativamente
bajas.
a.
Autoclave: horno a presión,
consiste en una cámara en la que el aire puede ser sustituido por vapor de agua
sometida a presión. Se opera a 121ºC
y 1 ATM.
de presión durante 20 minutos. De esta forma se consigue destruir todas las
formas vegetativas y esporas. Se lo utiliza para esterilizar todo material
resistente a esa temperatura y es muy utilizado para la esterilización de medios de
cultivos.
b.
Tindalización: (esterilización intermitente) consiste en someter el producto a
calentamientos intermitentes entre 56 y 100ºC durante 30 minutos con lo que se asegura
destruir las formas vegetativas. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente o a 37ºC , las esporas germinan y
las bacterias resultantes se hacen más sensibles al
calentamiento posterior.
3.- Radiaciones
a.
Luz UV: es absorbida a una longitud de onda de 240 a 280 nm por ácidos nucleicos causando daños genéticos
alterando las bases. Se la utiliza en la preparación de vacunas, cabinas de seguridad biológica, lugares de trabajo como
mesadas de laboratorios, est.
b.
Radiaciones ionizantes: actúan lesionando ácidos nucleicos. Se la utiliza sobre
todo en procesos industriales
para esterilizar dispositivos quirúrgicos, guantes, jeringas, etc.
Observaciones:
Resultados:
Material libre de microorganismos
Conclusiones:
El material se esteriliza para no infectar de microorganismos el trabajo ademas de ser útil para su nueva utilización aunque algunas cosas si se usan una vez ya no se vuelven a utilizar puesto que se contaminan de microorganismos y esto hace que ya no se puedan volver a utilizar
martes, 5 de junio de 2012
Preparacion de medios de cultivo
OBJETIVOS:
Ø
Lavar,
preparar y envolver correctamente el material que se someterá a esterilización.
Ø
Seleccionar
los métodos de esterilización adecuados para las diversas necesidades del
laboratorio de microbiología.
Ø
Comprobar
la efectividad del proceso de esterilización.
Ø
Elaborar
adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
Ø
Envasar
los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de
acuerdo al uso que se les dará.
Ø
Relacionar
la composición de los diversos medios de cultivo con sus características y
aplicaciones.
INTRODUCCIÓN
Por su
minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos,
sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario
cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación in Vitro.
Por su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos que interfieren en el estudio del microorganismo de interés, al que además de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento multiplicación, en ambientes
especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hábitats
naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos
que interfieren en el estudio del microorganismo de interés, al que además de
proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento multiplicación
DESARROLLO
Un medio de
cultivo es cualquier sustancia
líquida o sólida que puede utilizarse en el laboratorio para que
crezcan los microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo
necesario para el crecimiento, lo cual varía según el organismo que se quiere
cultivar, pero que comprende: agua, compuestos
nitrogenados, una fuente de
energía y otros factores de crecimiento.
Los requerimientos nutricionales de las
bacterias varían desde los sencillos compuestos inorgánicos de las
autótrofas hasta las complicadas vitaminas y factores de crecimiento de algunas
heterótrofas. Algunos medios, como por ejemplo el “agar nutritivo” son capaces
de soportar el crecimiento de muchas bacterias.
El agar es
el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se disuelve
completamente a 100°C
y se solidifica al enfriarse a 40°C .
De
acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
• Líquidos: Se utilizan
para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y
no tienen agar en su formulación.
• Semisólidos: Contienen
0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la movilidad de las
bacterias (presencia o ausencia de flagelo).
• Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su
formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y
formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al
microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más de un tipo de
colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar también se utilizan
para la determinación de células viables (recuento en placas).
De
acuerdo a su composición, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
•
Definidos: es aquél
medio de cultivo del cual se conoce su composición exacta. Son muy utilizados
en estudios fisiológicos. Los medios mínimos son medios definidos que
únicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer,
pero no para desarrollarse óptimamente.
•
Complejos: es aquél del
cual no se conoce la composición exacta del medio. A menudo, los medios
complejos emplean sangre, leche,
extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero
de las cuales se desconoce la composición química exacta. Estos medios son muy
utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos
nutricionales muy complejos.
OBSERVACIONES:
RESULTADOS:
Un medio de cultivo donde podemos observar los microorganismos y cultivarlos
CONCLUSIONES:
Es importante saber como utilizar los medios de cultivo para obtener grupos alimenticios como el yogur, la cerveza el vino entre otros.
Seguridad en el laboratorio de Microbiologia
El estudio de las bacterias, virus, parásitos,
hongos y otros agentes infecciosos que
pueden ser patógenos para el hombre, los animales u otras formas de vida
comporta riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos
utilizados. Las normas de Seguridad Biológica pretenden reducir a un nivel
aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material peligroso y son muy
rigurosas para los agentes más peligrosos y menos exigentes para los que causan
problemas de menor entidad. Deben ser consideradas como compromisos destinados
a conseguir que las personas que trabajan con agentes infecciosos en el
Laboratorio de Microbiología estén expuestas al mínimo riesgo
posible. Por otra parte, el personal del Laboratorio de Microbiología está
expuesto a riesgos no biológicos (químicos, físicos, eléctricos, etc.) comunes
a otros laboratorios.
La actitud y el modo de proceder de aquellos que
trabajan en el Laboratorio de Microbiología determinan su propia seguridad, así
como la de sus compañeros y la de la colectividad. El equipamiento y el diseño
del Laboratorio de Microbiología contribuyen a ésta sólo si las personas que
trabajan en él están motivadas, conocen las normas de seguridad y las aplican.
En nuestro país, la protección de los trabajadores
frente a los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos está
regulada por el Real Decreto (RD) 664/97 y la adaptación contenida en la Orden de 25 de marzo de
1998.
El
riesgo puede ser alto o muy limitado y depende de la motivación del personal,
de la infraestructura y de la metodología. De nada sirven la mejor ingeniería
sanitaria, un óptimo diseño arquitectónico o la tecnología más avanzada si el personal
desconoce o incumple las medidas establecidas para su seguridad. La formación
es, pues, la clave de la eficacia de los programas de seguridad y ésta debe ser
facilitada a todas las personas que están expuestas a los riesgos del
laboratorio: personal del laboratorio, de mantenimiento, de limpieza, etc.
Los trabajadores deben responsabilizarse de su
propia seguridad y de la de sus compañeros una vez las normas de seguridad han
sido establecidas, aprobadas, escritas y asumidas.
Medios de cultivo
Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según qué se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación...
Los Virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares por eso necesitan de un medio que contenga células vivas.
Clasificación:
Según sus cualidades físicas distinguimos:
§
Líquidos
§
Semi-sólidos
§
Sólidos
Según su formulación:
§
Químicamente
definidos: se conoce exactamente la cantidad de cada uno de los compuestos que
hay en el medio.
§
Complejos:
se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre,...). Por tanto, no
se conoce exactamente cual es la composición del medio. Sin embargo, presenta
la ventaja de que ya están presentes todos o casi todos los elementos que una
célula puede requerir.
Según su uso:
§
Medio
General: Es aquel medio donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto
aquellos que necesitan de unas condiciones especiales.
Ejemplo:Agar CLED
§
Selectivos:
permiten seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
§
Diferenciales:
permiten identificar una especie o grupo por su crecimiento ya sea por
su metabolismo, respiracion, etc.
Ejemplo:Medio
de McConkey
§
De enriquecimiento: son medios diseñados
para permitir el crecimiento del máximo número de especies posible. Pueden
usarse, por ejemplo, para estudiar todos los microorganismos presentes en una
muestra.
§
Mínimo:
contienen la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento
de una especie.
§
De transporte: está preparado para servir
de almacenamiento temporal a especímenes transportados. manteniendo su
viabilidad y su concentración.
Tinciones usadas en microbiología
Los mordientes, aunque no son colorantes, tienen gran
importancia en algunas técnicas de tinción. Los mordientes intensifican la
tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares
externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser
visualizados de otra forma.
Existen tres
tipos de técnicas de tinción: simples, diferenciales y específicas:
Tinciones simples: En las tinciones simples se usa un único
colorante, que siempre es de tipo básico. Se utilizan solamente para
incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán
teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de
la célula completa. Se fija el espécimen, se añade el colorante y se deja el
tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la
preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente, hay
que añadirlo justo antes del colorante.
Tinciones diferenciales: Las tinciones diferenciales se utilizan para
distinguir entre tipos de microorganismos. La técnica de tinción diferencial
consta de dos etapas: una tinción primaria (siguiendo el mismo método que en una
tinción simple) seguida de una tinción de contraste. En la tinción de contraste
se utiliza otro colorante que tiñe (y por tanto, revela) las células no teñidas
por el primer colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiología.
Por ejemplo, la tinción de Gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia,
ambas aplicadas a bacterias.
La tinción de Gram La técnica de la tinción de Gram fue
desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta tinción
clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas La
técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste:
1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta,
que tiñe de violeta.
2. Se añade el mordiente, yodo.
3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución de
acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su
tinción violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.
4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de
rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las
bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta más intenso.
1. Tinción primaria con fucsina básica, que tiñe todas las células
de rojo.
2. Calentamiento suave de la preparación para facilitar la
penetración del colorante en el interior de la célula.
3. Decoloración con una solución de ácido clorhídrico en etanol.
Este decolorante elimina la fucsina de todas las células excepto de las micro
bacterias, que la retienen debido a su superficie cérea.
4. Coloración de contraste con azul de metileno. Se tiñen de
azul todas las células previamente decoloradas, lo que facilita la
diferenciación entre las células de Mycobacterum, aún teñidas de rojo, v las células
restantes del espécimen.
Microbiología de los alimentos
La
importancia de los microorganismos en los alimentos es más evidente. La
producción de alimentos por técnicas microbiológicas es una actividad de
larga historia: los microorganismos alteran los constituyentes de los alimentos
de forma que los estabilizan permitiendo su mayor duración y, además,
proporcionan compuestos que confieren sabores característicos a los alimentos
por ellos producidos. Esta faceta se complementa con la acción de microorganismos alterantes de los alimentos y responsables de su deterioro
de forma que se hagan inaceptables por los consumidores.
Desde el
punto de vista sanitario, los alimentos pueden ser vehículos de infecciones (ingestión de
microorganismos patógenos) o de
intoxicaciones (ingestión de
toxinas producidas por microorganismos) graves. En este sentido se han
desarrollaron las técnicas de control microbiológico de alimentos.
Muchas
veces la causa de la contaminación del alimento se debe a medidas higiénicas inadecuadas
en la producción, preparación y conservación; lo que facilita la presencia y el
desarrollo de microorganismos que producto de su actividad y haciendo uso
de las sustancias nutritivas presentes
en éste, lo transforman volviéndolo inaceptable para la salud humana. Por esta
razón, es que una de las principales actividades en la conservación y
elaboración de alimentos a partir de productos vegetales y animales es la
reducción de la contaminación de los mismos, sea biótica o abiótica. Para poder
llevar a cabo esta actividad es necesario lo siguiente:
Identificar
los agentes contaminantes y las fuentes de contaminación.
Ø
Caracterizar
el potencial tóxico de los agentes y de las sustancias contaminantes individualmente.
Ø
Valorar
en términos reales el impacto sobre la salud del consumidor.
Ø
Controlar
los niveles de los contaminantes en los alimentos.
Ø
Establecer
programas prácticos para las personas involucradas en todos los sectores de la
cadena alimentaria (productores primarios y secundarios, transportistas, distribuidores,
organismos de control y consumidores).
Para el aseguramiento higiénico sanitario de los alimentos
no sólo debe de tomarse en cuenta el producir alimentos sanos,
organolépticamente aceptables, nutricionalmente adecuados, sino el garantizar
que dichos productos no se contaminen a causa de agentes biológicos, químicos y físicos durante la producción, transporte,
almacenamiento y distribución, así como durante las fases de su elaboración
industrial, manipulación e inmediata preparación para su consumo. Los alimentos
sean de origen animal o vegetal pueden fácilmente presentar contaminación por
microorganismos. Esta contaminación es una de las más estudiadas y puede
presentar un riesgo para la salud. Tenemos ejemplos de epidemias cuyas fuentes de
contaminación han sido alimentos con altos índices de microorganismos y la
actividad de ellos, que incluye entre otras cosas la producción de toxinas que
afectan la calidad del alimento.
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