Los mordientes, aunque no son colorantes, tienen gran
importancia en algunas técnicas de tinción. Los mordientes intensifican la
tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares
externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser
visualizados de otra forma.
Existen tres
tipos de técnicas de tinción: simples, diferenciales y específicas:
Tinciones simples: En las tinciones simples se usa un único
colorante, que siempre es de tipo básico. Se utilizan solamente para
incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán
teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de
la célula completa. Se fija el espécimen, se añade el colorante y se deja el
tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la
preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente, hay
que añadirlo justo antes del colorante.
Tinciones diferenciales: Las tinciones diferenciales se utilizan para
distinguir entre tipos de microorganismos. La técnica de tinción diferencial
consta de dos etapas: una tinción primaria (siguiendo el mismo método que en una
tinción simple) seguida de una tinción de contraste. En la tinción de contraste
se utiliza otro colorante que tiñe (y por tanto, revela) las células no teñidas
por el primer colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiología.
Por ejemplo, la tinción de Gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia,
ambas aplicadas a bacterias.
La tinción de Gram La técnica de la tinción de Gram fue
desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta tinción
clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas La
técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste:
1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta,
que tiñe de violeta.
2. Se añade el mordiente, yodo.
3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución de
acetona o etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su
tinción violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.
4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de
rosa las bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las
bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta más intenso.
1. Tinción primaria con fucsina básica, que tiñe todas las células
de rojo.
2. Calentamiento suave de la preparación para facilitar la
penetración del colorante en el interior de la célula.
3. Decoloración con una solución de ácido clorhídrico en etanol.
Este decolorante elimina la fucsina de todas las células excepto de las micro
bacterias, que la retienen debido a su superficie cérea.
4. Coloración de contraste con azul de metileno. Se tiñen de
azul todas las células previamente decoloradas, lo que facilita la
diferenciación entre las células de Mycobacterum, aún teñidas de rojo, v las células
restantes del espécimen.
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